雏鸭肝炎病毒临床毒株的分离鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

雏鸭病毒性肝炎（duck viral hepatitis，dvh）是针对雏鸭的一种传播迅速且高度致死的急性传染病，其特征为发病急，传播快，死亡率高。

临床特征症状表现为角弓反张，病理变化为肝炎和出血。

现在是严重危害养鸭业的重要传染病之一。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：鉴定并分离出新型鸭肝炎病毒，测出该毒株全基因序列，病毒的生物学特征和基因组特性。

研究内容：①鸭肝炎肝脏样品的rt-pcr鉴定；②鸭肝炎病毒的全基因测序，各组毒株基因同源性比对；③9日龄鸭胚培养分离病毒，病毒生物学特征与基因组特性的测定。

拟解决的问题：新型鸭肝炎病毒vp1全基因扩增时退火温度的选择决定着扩增产物跑核酸胶时条带亮度，也决定着能否做胶回收测序。

3. 研究的方法与方案

研究方法：将采集到的病料分类包装保存于-20℃冰箱，分批次各取5份样品提取RNA，做RT-PCR鉴别新型鸭肝炎病毒，然后将鉴别出的毒株VP1全基因扩增测序，最后将该毒株病料处理接种9日龄鸭胚，取24小时到96小时内死胚取尿囊液分离病毒并观察配体病变。

技术路线：1,病料的分装标记，随机选取5份样品提RNA;2,将提取RNA反转录并做PCR扩增，扩增产物跑核酸胶并进行曝光拍照，鉴定是否是变异株;3,将鉴定出来的变异株VP1全基因扩增测序，比对各组基因同源性;4,将变异毒株病料处理并接种9日龄鸭胚37℃温箱培养;5,取24到96小时死胚，放4℃冰箱预冷6小时（或者4℃冰箱过夜），取其尿囊液并观察胚体病变;6,利用血凝，血凝抑制实验，鸭胚传代培养等测定病毒生物学与基因组特性;可行性分析：本课题的研究针对国内的鸭病毒性肝炎变异毒株，采集到的病料也是来自于鸭肝炎流行地区，所在实验室拥有完善的实验所涉仪器，试剂，本课题指导老师拥有丰富的理论知识与娴熟的实验操作，本人作为动医大五学生也具备一定的实验操作技能与理论知识，本学期也是专门做毕业设计，所以时间上是充足的。

4. 研究创新点

我国目前流行的鸭肝炎毒株主要为A型和C型，两型之间没有交叉保护力，而市场上的鸭肝炎疫苗主要是针对A型，本课题只针对新型鸭肝炎病毒毒株进行鉴别并进行VP1全基因扩增测序，然后通过接种鸭胚培养分离出该毒株。

5. 研究计划与进展

2015.09~2015.10：将采集的病料处理并做RT-PCR鉴别，以期找出新型鸭肝炎病毒毒株；2015.10~2015.11：将找出的新型鸭肝炎病毒毒株VP1全基因扩增并测序，比对各毒株同源性；2015.11-2015.12：将含新型鸭肝炎病毒毒株样品处理接种9日龄鸭胚，观察鸭胚发生的病变，从而将该变异毒株分离出来，分离毒株的生物学特征与基因组特性测定。