细粒棘球绦虫Eg95蛋白的纯化和浓缩开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

细粒棘球蚴病，又称包虫病，是由带科棘球属的细粒棘球绦虫的中缘期幼虫(细粒棘球蚴)寄生于动物和人的肝、肺及其他器官内所引起的一种人兽共患病，该病广泛分布于世界各地，已造成严重的全球性经济问题和公共卫生问题^[1]。据估计全球约有5000万包虫病患者，甚至有的地区人群感染率可达10%；而动物包虫病每年造成的经济损失达到了20亿美元^[2]。现已证实中国30多个省(自治区)、直辖市有包虫病的感染病例。自1992年起，我国颁布了包虫病防治规划并在高发区实施，取得了一定的成效。但由于地域、经济、文化等现实因素，以药物驱治和健康教育等为主的综合性防治的实施难度较大^[3]，此外由于该病病原为寄生虫，抗原性复杂，虽然已证实棘球蚴的虫体和六钩蚴分泌抗原具有较好的保护作用(osborne 等,1982; heath等,1997)，但由于病原有着复杂的生活史，在体外培养中不能大量增殖，因此抗原来源有限，限制了其在免疫预防中的广泛应用。

近20年来，为了能更有效地控制该病，相关科研人员在研制细粒棘球综虫疫苗方面做了大量的工作，包括应用于中间宿主和终末宿主的各种疫苗，都取得了一定的进展。eg95蛋白、egm家族、抗原b、ega31、gst、ef1等都是具有发展前景的抗包虫病候选疫苗抗原。其中以eg95蛋白制成的基因工程亚单位疫苗，无论是试验动物的多样性还是试验地域的广泛性，都优于以上候选抗原，且在临床试验中取得了较好的疗效^[4]。除了eg95亚单位疫苗，eg95 蛋白其他类型的疫苗研究也取得了一定的成果。

基于以上原因,实验室对细粒棘球绦虫eg95蛋白进行了大量研究，并在前期成功将eg95基因于大肠杆菌内进行了大量表达，获得了的菌液并冷冻保存。后期对菌液进行超声破碎进而释放蛋白，并经过蛋白纯化仪和浓缩仪获得高浓度高纯度的eg95蛋白。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标

通过对表达的菌液进行处理获得高浓度高纯度的eg95蛋白。

研究内容

3. 研究的方法与方案

1.研究方法：

破碎菌液释放出表达的蛋白质于上清，离心去除沉淀，利用akta蛋白纯化仪纯化上清获得gst-eg95融合蛋白，酶切去除gst蛋白标签，纯化浓缩获得所需蛋白

2.技术路线(见附件)

4. 研究创新点

特色或创新之处

本次实验不仅进行了蛋白的大量纯化，而且在纯化的基础上进行了高浓度浓缩，为以后生产工作中大量蛋白质的纯化与浓缩提供了条件和方法。同时本次实验对EG95蛋白的纯化提供了一定方法。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展

9月3日10月3日：实验准备阶段，配制所需要的溶液以及清洗所需要的烧杯，瓶子仪器等。

10月4日11月4日：取一部分冷冻菌液，悬浮处理，超声破碎，纯化蛋白获得eg95-gst融合蛋白溶液，并测定蛋白纯度及大小是否正确。-80℃冷冻保存溶液。