番茄病毒病的分子鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus, tswv)隶属于布尼亚病毒科(bunuyaviridae)番茄斑萎病毒属(tospovirus), tospovirus是bunuyaviridae中唯一一个可以侵染植物的属。

tswv广泛分布于世界各地,可侵染100多个科1000多种植物,常造成严重的经济损失,但在我国报道很少。

近年来,随着其主要传毒介体西花蓟马(frankliniella occidentalis)的传播和扩散,我们发现tswv也在逐渐蔓延扩散,分布范围日益扩大,寄主种类也在不断增加,加之tswv难以防治,对农业生产构成了越来越严重的威胁。

2. 研究的基本内容和问题

由于ER-stress也可诱导死亡，那么N诱导的死亡是否是因为N在内质网的聚集而导致的stress而产生的呢？在本生烟中从表达p2300-Bip和诱导死亡的最小段或缺失突变体，观察死亡情况。

所需数据：（1）症状照片 （2）Western blot检测蛋白表达的结果（N和Bip）

3. 研究的方法与方案

构建突变体，消除内质网胁迫，通过数据观察死亡情况。

本实验采用蛋白质印迹法，将蛋白质混合样品经sds-page后，分离为不同条带，其中含有能与特异性抗体（antibody）结合的待检蛋白质（抗原，antigen），将page胶上的蛋白条带转移到硝酸纤维素（nitrocellulose，nc）膜或聚偏二氟乙烯 [poly(vinylidene difluoride)，pvdf）]膜上，此过程称为转印（blotting），以便随后的免疫学检测。

转印后，将nc膜或pvdf膜与抗血清（含特异性抗体，即第一抗体）一起孵育，使第一抗体与待检蛋白结合，再用酶标第二抗体孵育膜，使第二抗体与第一抗体结合反应。

4. 研究创新点

创新之处在于构建突变体，消除内质网胁迫，通过数据观察死亡情况。

5. 研究计划与进展

预计三个月内成功构建突变体，消除内质网胁迫，通过测定得出的数据观察死亡情况。

得到症状照片以及Western blot检测蛋白表达的结果。