江苏部分地区猪源沙门氏菌的分离鉴定及耐药性分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.课题意义沙门氏菌为肠杆菌科沙门菌属成员，是一种重要的人畜共患的食源性细菌[1, 2]。

沙门氏菌主要通过污染的食物感染人类，致使人类食物中毒[3]；而在我国90%的沙门氏菌感染引起的食物中毒来源于动物性食品[4]，我国是生猪生产和消费大国，猪肉及猪肉生产链中的沙门氏菌污染情况应该受到重视[5]。

猪肉沙门菌的污染是一个复杂的过程,有学者发现猪的沙门氏菌污染主要来自养殖场[6, 7]，有学者认为沙门氏菌污染更多的与屠宰污染有关[8]，了解沙门氏菌各环节污染情况对于防控沙门氏菌污染有着重要的意义。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标 本实验先从采集的猪场肛门拭子和屠宰场样品分离出沙门氏菌；筛选出鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌的血清型特异引物，并鉴定出分离株中的鼠伤寒和肠炎沙门氏菌。

选取部分沙门氏菌分离株，利用纸片扩散法和pcr扩增相关耐药基因，从表型和基因型两方面对沙门氏菌的耐药性进行分析。

2.研究内容2.1沙门氏菌的分离鉴定：采集猪场肛门拭子和屠宰场拭子先选择性增菌再接种平板，挑取可疑菌落进行pcr鉴定。

3. 研究的方法与方案

1.研究方法1.1沙门氏菌的分离鉴定：样品选择性增菌，平板划线，挑取疑似菌落，利用沙门属特异性基因inva进行pcr鉴定。

1.2利用实验室保存的血清型已知的沙门氏菌，筛选鼠伤寒和肠炎沙门氏菌的血清型特异引物，并用于此次的沙门分离株的鉴定中。

1.3利用纸片扩散法检测沙门氏菌分离株对挑选的10种抗生素的耐药情况；之后pcr 扩增相关耐药基因，确定耐药基因在各菌株中的分布情况及耐药表型和基因型的对应情况。

4. 研究创新点

沙门氏菌有超过2500个血清型，不同血清型沙门氏菌的侵袭力与致病力显著不同，其所引起的疾病都是和宿主相互对应的，因此对菌属型别繁多的沙门氏菌进行快速、灵敏的诊断分型具有重大意义。

传统血清学方法费时费力，分子血清分型技术具有快速、准确、重复性好等特点;因此血清型特异性引物是分子血清分型的关键。

本次实验针对已报道的部分鼠伤寒和肠炎沙门氏菌的引物进行验证，找到特异性和灵敏度更强的血清型特异引物。

5. 研究计划与进展

第一阶段（2017.09-2017.10）熟悉实验室操作，查看相关文献完善实验设计；第二阶段（2017.10-2017.12）采集猪场和屠宰场样品，完成沙门氏菌的分离鉴定；第三阶段（2017.12-2108.01）对上一阶段分离到的沙门氏菌进行分型；第四阶段（2018.01-2018.04）选择部分沙门氏菌分离株进行药敏实验和相关耐药基因的检测；第五阶段（2108.04-2018.05）分析实验结果，撰写论文。