截形叶螨中V–ATPase基因沉默对其生殖影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

课题研究意义：截形叶螨属蛛形纲蜱螨目叶螨科，为害棉花、枣树、玉米及豆类等作物，是一种世界性重要的农业害虫。

它的体积小，生活隐蔽，不易直接进行观察，难以在其发生早期发现并进行防治[1]。

该螨繁殖能力强，可以在植物的一个生长季节中发生多代，难以进行控制，一旦防治失时便会造成巨大损失，所以农户使用化学农药的频率和强度增加，这导致截形叶螨极易对药剂产生抗药性[2]。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：研究v-atpase对截形叶螨生殖的影响及对v-atpase基因进行沉默在该螨防治中的可能应用价值。

研究内容：结合rnai技术对截形叶螨v-atpase基因进行沉默，检测截形叶螨的产卵量和卵孵化率。

拟解决的关键问题：探究截形叶螨中v-atpase在生殖方面的影响，探索防治截形叶螨的新方法。

3. 研究的方法与方案

研究方法：通过人工培育获得一个单雌系，然后利用近缘物种二斑叶螨的dna序列设计引物扩增截形叶螨的cdna得到v-atpase基因，利用试剂盒方法在体外表达合成v-atpase基因的dsrna,使用含v-atpase基因dsrna的溶液浸泡静Ⅲ期截形叶螨24h，将处理过的虫子转移至适宜条件下饲养并检测其1至7每日产卵量和1至7每日卵孵化率。

技术路线：对截形叶螨的v-atpase基因进行扩增测序合成截形叶螨v-atpase基因的dsrna观察截形叶螨的产卵量和卵孵化率浸泡法沉默v-atpase基因的表达实验方案：1、截形叶螨实验种群的构建。

在菜豆上接入一头静Ⅲ时期的雌螨，让其孤雌生殖。

4. 研究创新点

本课题的两个独特之处：1、 本课题对截形叶螨中的v-atpase进行研究。

此前有加拿大的科研人员对二斑叶螨进行了基因组测序，并验证了部分基因的功能。

此外，他们还进行了二斑叶螨v-atpase基因的敲除实验，结果表明v-atpase基因表达受干扰的二斑叶螨产卵量减少，受干扰的二斑叶螨体色变黑并且寿命缩短。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展2017.3.29至2017.7.9学习饲养截形叶螨并构建实验种群及对v-atpase基因进行扩增测序2017.12.27至2018.1.14合成截形叶螨v-atpase的dsrna2018.2.26至2018.3.15浸泡法对v-atpase基因进行沉默，观察产卵量和卵孵化率课题进展：1、课题已完成的内容：①实验所需的截形叶螨种群构建完成。

通过回交培养野外种群获得了一个单雌系，将其作为本课题实验种群进行研究。

②完成了截形叶螨v-atpase基因的扩增。