从鲤鱼鳍条或鳞片中快速提取DNA方法的研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1、现状分析

鲤鱼，中文别名鲤拐子、鲤子、毛子，红鱼。鲤科（cyprinidae）中粗强的褐色鱼，学名cyprinus carpio。原产亚洲，后引进欧洲、北美以及其他地区，杂食性。鲤鱼身体侧扁，腹部圆润，口呈马蹄形，有须两对，身体呈梭形，背鳍和臀鳍均有一根粗壮带锯齿的硬棘，不同品种体色有差异。其养殖历史悠久 , 养殖产量在水产养殖

业中占相当大的比重 , 因而对其丰富的资源的遗传学研究和多样性保护十分必要^[1]。目前经全国水产原良种审定委员会审定和公布，适宜推广的优良养殖品种共39个，其中鲤鱼有荷包红 鲤、兴国红鲤、建鲤、荷包红鲤抗寒品系、德国镜鲤选育系、丰鲤、荷元鲤、三杂交鲤、颖鲤、岳鲤、芙蓉鲤、德国镜鲤、散鳞镜鲤、松浦鲤和万安玻璃红鲤等15个^[2]。近年来竞争性鱼类放流、酷渔滥捕、水质污染等因素的影响，鲤鱼的自然资源量日益减少，特别是野生黄河鲤鱼的数量在持续减少。随着国家对野生生物资源的重视，采取了增殖、放养等措施来保证野生生物的数量。但由于缺乏保护意识、管理措施和有效的鉴定手段，通过人工放养和人工养殖的逃逸，人工养殖的黄河鲤鱼进入黄河水域，使得野生黄河鲤鱼和人工养殖鲤鱼杂交，两者的基因使得野生黄河鲤鱼和人工养殖鲤鱼杂交，两者的基因发生交流，从而引起黄河鲤鱼基因的混杂进而使其品种变得较杂^[3]。对于品种混杂的情况分析可以采用微卫星分子标记等dna标记技术对鲤鱼进行了遗传多样性分析，以期通过对鲤鱼的种质鉴定了解鲤鱼的遗传结构特征、种群历史，为其遗传资源的保护提供较为准确的相关信息和依据^[4]。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标

研究掌握改进hotshot方法从鲤鱼鳍条和鳞片提取dna的快速方法，通过对试剂盒和本法提取dna的浓度和纯度对比以及pcr扩增的特异条带对比，分析两法提取dna的效率和效果，并研究分析加热时间以及样品粉碎程度对改进方法的影响，为运用改进hotshot提供基础依据。

2.研究内容

3. 研究的方法与方案

1.配置dna提取试剂 配置200ml碱性裂解溶液（naoh200mg、edta14.88mg），此法制备碱性裂解溶液不需要调整ph，ph为12，其中25mm naoh，0.2mm edta-na₂；配置200ml中和缓冲溶液（tris-hcl 1.3g），制备出中和缓冲溶液为40mm tris-hcl，ph为5。

2.利用本法提取鳞片和鳍条dna 取2片鳞片于1.5ml ep管，取20mg鳍条于另一ep管，加入75μl碱性裂解溶液，放入95℃水浴锅30min，然后将样品置于4℃冰水浴冷却，立即加入中和缓冲溶液75μl，制得最终制剂，并测量od值保存至-20℃。

3.采用试剂盒提取dna 采用omega试剂盒按照说明书对鲤鱼血液dna进行提取：

4. 研究创新点

采用小鼠HotSHOT快速提取DNA方法，并予以改进，构建新型提取鲤鱼DNA的方法。该实验方法极大地节约成本。降低了操作难度，提取速度加快，实验操作无污染。

5. 研究计划与进展

通过已有的研究方法，按照操作进行；并分析数据。最后得出结论。得出该方法成本低廉、操作简便、并且少有有机溶剂污染。