高产壳聚糖酶菌株的筛选开题报告

1. 研究目的与意义

我国作为临海大国，海域辽阔，有着丰富的甲壳素资源。甲壳素通过脱乙酰化生成壳聚糖。壳寡糖通过壳聚糖降解得到，其水溶性和生物特性较好，壳寡糖更适合规模化量产，它在食品、医药、保湿护肤品和生物病虫害防治剂等领域都有广泛应用。目前壳寡糖的工业制备还是依靠超声波法、H2O2 氧化法和酸解法等传统的物理、化学方法，这些方法不仅成本高、能源消耗大，而且会对环境造成污染，急需寻找一种既经济又环保的方法代替传统工艺。此时壳聚糖酶法制备壳寡糖应运而生，此方法有对壳聚糖特异性强、反应条件温、壳聚糖酶来源广等优点。因此筛选产酶能力高的菌株、优化其产酶条件就成为酶法生产壳聚糖的重要前提。

2. 研究内容和预期目标

本实验选择苏州不同地方优质土壤资源-在苏州科技大学校内腐殖质土壤埋样作为菌株的分离源，采用壳聚糖筛选培养基进行平板初筛，通过对比生长周期、菌落和透明卷的大小以及透明卷直径与菌落直径之比,筛选出了菌作为复筛菌株。通过 dns 法测定发酵液酶活力，进一步筛选产酶能力较强的菌株。因此筛选产酶能力高的菌株、优化其产酶条件就成为酶法生产壳聚糖的重要前提。

主要研究内容：

(1) 筛选产壳聚糖酶活性高的菌株

3. 研究的方法与步骤

高产壳聚糖酶菌株的初筛

在 250ml 锥形瓶中加入 45 ml 无菌去离子水并加入 5g 土样，在锥形瓶中放入 5颗玻璃珠，在 170 r/min、30℃的摇床中放置 30min。将样品混合均匀后进行梯度稀释(10 -1 ～10 -5 )，选取 10 -4 、10 -5 稀释度的样液，各取 0.2 ml 涂布在初筛平板上，将平板置于30℃恒温培养箱中培养6～7天。挑选具有壳聚糖水解透明圈且透明圈较大(通过比较每种菌落的直径及透明圈直径比来得出)的菌落于另一初筛平板上划线分离，得到单菌落。将获得的单菌落接种于 pda 斜面培养基中保存，以便以后使用。

壳聚糖酶产生菌的复筛

4. 参考文献

1]孙洪彦.从水虿中提取壳聚糖及壳聚糖系列产品的开发应用[d].济南市:山东师范大学,2015.

[2]任晓敏,杨锋,黄承都,等.壳聚糖的降解及其应用研究[j].大众科技,2018,20(5):30－33.

[3]原佳琪,梁爽,孙雅煊,等.壳寡糖的制备及生物活性研究进展[j].生命的化学,2019,39(4):759－765.

5. 计划与进度安排

1、第17周（22-23-1学期）-第2周（2024年12月27日--2024年3月6日）接受任务、查阅和翻译文献、撰写及完成开题报告

2、第3周-第4周（2024年3月7日--2024年3月20日）根据实验步骤进行菌种目的地筛选，菌种的初筛，复筛。

3、第5周（2024年3月21日--2024年4月10日）进行种子扩大培养，收集实验结果，分析数据