来源Bacillus altitudinis耐热甲壳素酶基因工程菌的构建及其酶学性质初探开题报告

1. 研究目的与意义

1.1研究背景

甲壳素，又可以称为几丁质，由 n-乙酰氨基葡萄糖（glcnac）作为基本单元通过β-1,4 糖苷键连接而形成的一种天然生物大分子。甲壳素在自然界中的分布范围极为广泛，在自然界中，甲壳素也作为唯一的天然碱性多糖而存在。

2. 研究内容和预期目标

主要研究内容

在本研究中，通过pcr手段克隆了来自bacillus altitudinis甲壳素酶bachia，随后将该片段连接至原核表达载体pet-28a，并成功转化之dh5α感受态细胞，随后通过测序和双酶切实验验证重组质粒pet-28-bachia的正确性，最后提取重组质粒转化表达载体bl21，成功构建甲壳素酶基因工程菌bl21（pet-28-bachia）。利用上清液初步探究该酶的酶学性质，结果显示该酶的最适温度和ph以及温度和ph耐受性。最后利用i-tasser建立bachia甲壳素酶的三维结构模型，并用coach对底物作用的关键氨基酸位点进行了预测。利用分子克隆技术构建成功了一株热稳定较好的甲壳素酶bachia，并基于氨基酸序列分析和同源建模技术构建了该酶的三维结构模型，为后续该酶的分子改造，以及工艺优化鉴定了坚实的基础，具有重要的应用意义

预期目标

3. 研究的方法与步骤

3.1研究方法

1）引物设计：利用酶切位点分析网站 http://www.detaibio.com/sms2/rest_map.html 对分析甲壳素酶基因，分别对上游下游引物加入酶切位点，并引入保护碱基。

2） pcr扩增目的基因：依据细菌基因组提取试剂盒说明书提取bacillus altitudinis的基因组，获得的基因组dna作为获取目的甲壳素酶基因的pcr模板 dna。

4. 参考文献

[1]tharanathan r n, kittur f s. chitin--the undisputed biomolecule of great potential [j]. critical reviews in food science and nutrition, 2003,43(1):61-87.

[2]boudrant j, meyer d, muzzarelli r a a. current views on fungal chitin/chitosan, human chitinases, food preservation, glucans, pectins and inulin: a tribute to henri braconnot, precursor of the carbohydrate polymers science, on the chitin bicentennial[j]. carbohydrate polymers, 2012,87(2):995-1012.

[3]dahiya n, tewari r, hoondal g s. biotechnological aspects of chitinolytic enzymes: a review [j]. applied microbiology and biotechnology, 2006,71(6):773-782.

5. 计划与进度安排

1、第17周（22-23-1学期）-第2周（2022年12月27日--2024年3月6日）接受任务、查阅和翻译文献、撰写及完成开题报告

2、第3周-第4周（2023年3月7日--2023年3月20日） 学习各种在线分析网站，不断练习

3、第5周（2024年3月21日--2024年3月27 日）学习使用ncbi与pdb等数据库