高产酸性蛋白酶菌株筛选开题报告

 2024-01-02 10:01

1. 研究目的与意义

1.1研究背景

酸性蛋白酶是在酸性(ph2.0-5.0 )条件下具有催化水解蛋白质活性的一组酶系总称,这类酶主要是利用其上的两个天冬氨酸残基活性位点作用于蛋白质分子的内侧或外侧的特定酸胺键上从而将蛋白质降解成小分子多肤或游离氨基酸。由于良好的酶促反应要求较严格的酸性环境,而在这种环境中往往很少有杂菌滋生,有效地避免了酶解产品发生腐败、变质现象,因此这类酶在食品、工业以及医药等许多行业中存在一定的潜在应用价值。

酸性蛋白酶有多种分类方式,根据酶在机体内发挥的功能不同分为al.a2,a3等三个酸性蛋白酶家族,其中a1具有较强的消化能力,如动物体内的胃蛋白酶和凝乳酶等消化酶,a2存在于抗原细胞内,参与细胞凋亡、免疫反应等过程,主要有组织蛋白酶e和d两种,a3则与化学信息物质的调控有关,比如高血压蛋白原酶t3o。若依据酸性蛋白酶在蛋白分子上的作用位点不同,又可以分为内切和外切酶,而按照产生酸性蛋白酶的菌种来源不同,还可将其划分为真菌酸性蛋白酶和细菌酸性蛋白酶,其中真菌包括霉菌和酵母菌等两种主要的酸性蛋白酶产生菌,目前霉菌酸性蛋白酶已基本实现工业化大规模生产,在吝行业中的应用也最广泛。

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2. 研究内容和预期目标

2.1主要研究内容

在工业生产中酸性蛋白酶的需求量较大,但目前我国产酸性蛋白酶株的品还比较单一,因此,需要开发新型的微生物源蛋白酶和选育高产蛋白酶菌种。酸性蛋白酶是在酸性环境下可以水解蛋白的一类酶,主要由真菌中的各种霉菌(如根霉和曲霉等)产生。实验将此从土壤中筛选出一株可以在酸性环境下产蛋白酶的菌株,筛选出来后采用福林酚法测定蛋白酶活,再经过形态学观察、生理生化实验验证筛选出来的菌株是否为高产酸性蛋白酶菌株。

2.2内容要求

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3. 研究的方法与步骤

3.1 初筛

取5g土样加入到50mllb液体培养基中,30℃、150rmin#8722;1过夜培养,获得的菌液稀释10、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8倍,从10-4-10-8各取100μl涂布于含干酪素的筛选培养基平板上,在30 ℃恒温培养箱中倒置培养 2-3 d,观察培养基上水解圈直径(d)和菌落直径(d),挑选菌圈比(d/d)较大的菌株用于复筛。

3.2 复筛

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4. 参考文献

[1]彭欣,冯璨,马香,等.产酸性蛋白酶深红沙雷氏菌的筛选及其在种子萌发中的应用[j].中国农业科技导报,2022,24(9):88-95.

[2]孙作宝.酸性蛋白酶高产菌株的选育[j].农家致富顾问,2016(24):22.

[3]赖颖,鲁四海.酸性蛋白酶产生菌的筛选及其部分性质研究[j].周口师范学院学报,2013,30(2):70-72.

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5. 计划与进度安排

1、第17周(22-23-1学期)-第2周(2024年12月27日--2024年3月6日)接受任务、查阅和翻译文献、撰写及完成开题报告

2、第3周-第4周(2024年3月7日--2024年3月20日)学习各种在线分析网站,不断练习

3、第5周(2024年3月21日--2024年3月27日)学习实验操作,了解各仪器使用方法

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