副猪嗜血杆菌动物模型的建立和毒力测定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

一、本课题的意义、国内外研究概况、应用前景副猪嗜血杆菌(haemophilus parasuis,hps)是一种非溶血、nad依赖性的革兰氏阴性短小杆菌，属于需氧或兼性厌氧菌，在适宜培养基上生长的菌落呈圆形，隆起，表面光滑，边缘整齐，灰白色半透明，针尖大小，无芽抱，无鞭毛[1]。

作为一种机会致病菌，通常存在于健康猪只的上呼吸道部位。

可以从1日龄健康猪的鼻腔、支气管分泌物，尤其是大支气管的分泌物中分离到本菌，也可以从患病猪肺中分离到本菌，但健康猪肺部分离不到。

2. 研究的基本内容和问题

二、研究的目标、内容和拟解决的关键问题1、研究的目标是建立稳定准确可靠的副猪嗜血杆菌病动物实验模型及实验方法；测定不同菌株对实验动物的毒力即半数致死量（ld50）。

2、研究的内容主要分为三部分：① 目的菌株的复苏、分离和纯化及细菌cfu、mtt法测定细菌数。

② 实验动物攻毒、饲养及观察记录。

3. 研究的方法与方案

四、研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析1、研究方法：构建动物模型进行毒力测定。

2、技术路线：目的菌株复苏及培养纯化-培养物活菌数检测-cdcd仔猪购入和饲养-攻毒前hps检测-实验动物攻毒-实验动物饲养及记录-剖检及病理变化观察-细菌分离培养及pcr检测3、可行性分析① 材料：副猪嗜血杆菌菌株由本实验室保存，具备各种试剂与仪器。

实验动物来源及饲养已具备完善的流程、场地及经验。

4. 研究创新点

五、特色或创新之处副猪嗜血杆菌动物模型的建立尚不完善，包括实验动物种类、来源、攻毒途径，饲养标准、病理变化等。

在检测副猪嗜血杆菌培养物中活菌数时使用了mtt法，这在该菌检测方法中尚属首次，因其国内研究成果较少，所以本法检测活菌数的方面具有一定的探索价值。

应用方法主要原因是在制备接种动物的抗原前，需要测量制备好的培养物中副猪嗜血杆菌活菌数是否达到制备抗原所需浓度，常用的平板计数法因其耗时较长，检测期间可能引起制备好的培养物中菌体活力下降或者死亡裂解等因素，可能使抗原效果下降。

5. 研究计划与进展

六、研究计划及预期进展1、副猪嗜血杆菌菌种复苏及cfu、mtt测定，攻毒前准备。

（9月份）2、实验动物攻毒、饲养、观察及记录。

（9-10月份）3、病理剖检及pcr检测。