鸡p21基因启动子的克隆与分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

p21蛋白是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂家族中的成员。

其既能通过cdks复合物活性，协调细胞周期、dna复制与修复之间的关系［１］。

同时，其在细胞分化、袞老、调亡以及肿瘤发生发展中都扮演重要角色［２］。

2. 研究的基本内容和问题

1.1研究目标（1）扩增p21启动子序列（2）构建p21启动子荧光素酶报告载体（3）测定p21启动子的活性1.2研究内容1.2.1克隆p21启动子区通过软件比对分析鸡p21基因序列和est信息，确定应用启动子分析软件，分析p21启动子序列特征，设计特异性引物，pcr扩增p21启动子区（-2960至 67，3028bp）。

1.2.2构建p21启动子荧光素酶报告载体将扩增的p21启动子片段与目的载体pgl2连接，构建重组质粒pgl2-p21p。

1.2.3测定p21启动子的活性 荧光素酶报告载体是一种含有荧光素酶报告基因的载体，其转染到细胞中后，可用荧光素酶检测系统灵敏方便地测定荧光素酶基因的表达。

3. 研究的方法与方案

2.1研究方法本项目拟采取pcr扩增p21基因的启动子区，将目的片段连接到目的载体pgl2上，构建重组质粒pgl2-p21p，瞬时转染df-1细胞，检测p21启动子的活性。

2.2技术路线p21启动子序列分析并合成引物 ↓通过pcr扩增p21启动子 ↓构建pgl2-p21p荧光素酶报告载体　　　　↓分析p21启动子活性2.3实验方案2.3.1p21启动子基因的克隆利用primer premier 软件设计引物，以提取的鸡肌肉细胞的基因组为模板，pcr扩增p21启动子基因，将pcr所得片段与t-载体连接，构建t-p21p 重组质粒，测序，获得基因序列。

2.3.2构建p21启动子的荧光素酶报告载体将已构建的t-p21p重组质粒与pgl2-basic 载体进行双酶切，切胶回收目的片段和线性化双粘性末端的pgl2-basic载体。

4. 研究创新点

p21在人类的细胞信号通路中仍是研究的热门，但禽类p21的功能尚无深入的研究，并且禽类细胞信号通路尚未明晰。

本实验通过克隆鸡p21启动子并分析其活性，为今后研究p21在禽类细胞周期中的相关作用奠定基础。

5. 研究计划与进展

2015.09-2015.10 p21启动子序列分析、合成引物、扩增p21启动子基因2015.10-2015.11 构建p21启动子荧光素酶报告载体2015.11-2015.12 测定p21启动子的活性2015.12-2016.01 最后数据的比较分析，论文的撰写