猪圆环病毒2型重组Cap蛋白的表达及纯化开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

国内外研究概况

猪圆环病毒（porcine circovirus，pcv）属于圆环病毒科，圆环病毒属，它有两个血清型：pcv1和pcv2^[1]。pcv1广泛存在于猪体内和猪源传代细胞系，无致病性；pcv2不仅可以感染猪引起原发性的断奶仔猪多系统衰竭综合征（pwms），还可以侵害猪的免疫系统，引发仔猪a2型先天性震颤（ct）、成年猪皮炎肾炎综合征（pdns）和呼吸道疾病综合（prds），对世界养猪业危害严重，因而世界各国都非常重视对pcv2的研究^[2]。

猪圆环病毒2型（pcv2）基因组为单链环状共价闭合的dna，不同于原来发现的一种猪圆环病毒（pcv1），病毒粒子无囊膜，呈正二十面体，直径 17nm 左右，是目前发现的最小的动物病毒，对外界环境抵抗性强^[2]。基因组大小为 1766～1769bp，有两个较大的开放阅读框，即orf1编码的与病毒滚环复制相关的rep蛋白，orf2编码的核衣壳（cap）蛋白^[17]。orf2编码的核衣壳（cap）蛋白是病毒唯一的结构蛋白，包含主要的抗原中和表位，具有良好的免疫原性，是作为基因工程亚单位疫苗和血清学诊断研究的首选基因^[3]。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标

研究可溶性表达猪圆环病毒2型（pcv2）orf2基因，大量表达目的蛋白，并对表达出的cap蛋白进行纯化及鉴定，用以确定利用重组cap蛋白制备猪圆环病毒2型vlp疫苗的可行性。

研究内容

3. 研究的方法与方案

研究方法

主要为实验法：用iptg诱导对菌种进行诱导，使目的蛋白大量表达，通过离心收集菌体，超声破碎破坏菌体后，收取上清液（目的蛋白可溶），利用亲和层析柱对目的蛋白进行纯化，最后进行western-blotting分析，对目的蛋白纯化效果进行鉴定。

技术路线(见附件)

可行性分析

4. 研究创新点

特色或创新之处

目的基因表达的蛋白不具有可溶性是进行基因重组蛋白表达时经常遇到的问题，表达的蛋白存在于包涵体中十分不利于进行蛋白的纯化，本实验将目的蛋白表达于上清液中，以便于进行蛋白的纯化，为疫苗的研发奠定基础。

5. 研究计划与进展

研究计划

2015.09-2015.10：阅读相关文献，熟悉技术路线及相关背景知识，熟悉实验室常规仪器操作和基本实验方法。

2015.10-2015.11：在熟悉基本实验技能的情况下，完成从目的蛋白大量表达到纯化蛋白的western-blot鉴定的整个试验流程。