猪不同代谢类型骨骼肌差异表达的环形RNA的筛选及其功能分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）骨骼肌主要由肌纤维构成。

肌纤维的细胞形态、收缩方式以及代谢特点决定了肌纤维的类型[1]。

肌纤维可分为4个亚型，即慢速氧化型肌纤维（myhc-Ⅰ型，myh7）、快速氧化型（myhc-Ⅱa型, myh2）、快速酵解型（myhc-Ⅱb型, myh1）和中间型（myhc-Ⅱx型, myh4）[2]。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标本研究拟通过rnase r的方法筛选猪肌肉特异性高标的cirrna，比较成年二花脸猪不同代谢类型肌纤维骨骼肌cirrna的表达含量，研究研究差异circrna对猪肉肌肉纤维分型生产的作用。

研究内容1、对预测的猪骨骼肌cirrna进行真实性验证利用rnase r核酸外切酶的特性，去除总rna中的线性rna，通过rt-pcr将cirrna反转录成cdna，在cirrna连接处设计背靠背引物，进行pcr产物测序。

2、不同代谢类型骨骼肌表达cirrna的比较分析筛选出骨骼肌特异性高表达的cirrna，采用realtime pcr检测不同代谢类型骨骼肌cirrna的表达水平，并通过生物信息学的方法预测差异cirrna调控靶基因的功能。

3. 研究的方法与方案

利用猪转录组预测的cirRNA数据库，设计背靠背引物进行真实性验证，确定猪肌肉特异性表达比较不同代谢类型肌纤维骨骼肌的cirRNA表达水平通过siRNA干扰或OE技术对筛选出的差异circRNA进行功能验证

4. 研究创新点

利用对照试验分析cirrna对于肌肉纤维在转录及表达中的作用。

通过比较两种不同肌肉的肌纤维类型，对预测的猪骨骼肌cirrna进行真实性验证，筛选，研究高表达circrna调控猪肉肌肉纤维的功能分析。

是创新的研究cirrna对于猪肉品质的作用，具有现实意义。

5. 研究计划与进展

2017年9月-10月，进行动物饲养实验，采集样品，记录动物体重和肌肉重。

2017年10月-11月，进行猪肉样本rna的提取，以及反转录。

通过荧光蛋白pcr证明猪不同的肌肉肉质不同是其表达存在差异性，采用rt-pcr技术进行扩增。