1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1.1研究背景
二氧化氯（clo2）是一种呈黄绿色或橙黄色的气体，曾是国际上公认的安全、无毒、绿色消毒剂。它极易溶于水而不与水反应，几乎不发生水解（水溶液中的亚氯酸和氯酸只占溶质的2），在水中的溶解度是氯气的5～8倍。溶于碱溶液而生成亚氯酸盐和氯酸盐。二氧化氯具有杀菌、漂白、除臭、消毒、保鲜等多种功能。二氧化氯对细菌及芽胞、病毒、真菌等微生物有强大的杀灭作用,且在
其使用浓度时对高等动物无任何不良作用,加之微生物对其也不产生抗药性。同
2. 研究的基本内容和问题
2.1 研究目标：通过小鼠经口灌服二氧化氯急性毒性试验，评价二氧化氯对小鼠的安全性，为开发新型二氧化氯消毒剂提供数据支持。
2.2 研究内容：本课题拟采用小鼠为实验动物，经口灌服给药后通过观察临床反应、测定ld50、分析二氧化氯纯度等方法，为研发安全、高效的新型二氧化氯消毒剂提供依据。
2.3 拟解决的关键问题：通过急性毒性试验，科学合理评价新型二氧化氯消毒剂的安全性，使之更好应用于畜牧生产。
3. 研究的方法与方案
3.1 研究方法：通过给小鼠灌胃不同剂量的二氧化氯溶液，观察给药后14天内小鼠的临床反应，记录小鼠死亡情况并进行病理剖检（以临床反应评分表为标准对给药后小鼠临床反应进行科学评价），计算二氧化氯经口给药的LD50，对二氧化氯的口服安全性进行科学评价。
临床反应评分表
临床观察 | 指征 | 可能涉及的器官组织和系统 | |
鼻孔呼吸阻塞，呼吸频率，和深度改变，体表颜色改变。 | A | 呼吸困难或费力，喘息（呼吸频率较低） | |
腹式呼吸，吸气时腹部明显偏斜 | CNS的呼吸中枢，肋肌麻痹，胆碱能神经麻痹。 | ||
喘息，用力深呼吸，有明显的吸气声 | CNS的呼吸中枢，肺水肿，呼吸道分泌物蓄积，胆碱功能减弱 | ||
B | 呼吸暂停，用力呼吸后出现短暂的呼吸停止 | CNS的呼吸中枢，肺心功能不足 | |
C | 紫绀，尾部，口呈蓝色 | 肺心功能不足，肺水肿 | |
D | 呼吸急促，呼吸快而浅 | 呼吸中枢刺激，肺心功能不足 | |
E | 鼻分泌物，红色或无色 | 肺水肿，出血 | |
运动功能，运动频率和特点的改变 | A | 困倦，动物出现昏睡，但易被警醒而恢复正常运动 | CNS的睡眠中枢 |
B | 正常反射消失，翻正反射消失 | CNS，感官，神经肌肉 | |
C | 麻痹，正常反射和疼痛反射消失 | CNS，感官 | |
D | 强制性昏厥，无论如何放置，姿势不变。 | CNS，感官，神经肌肉，自主神经 | |
E | 运动失调，动物走动时不能控制和协调运动，但无痉挛，局部麻痹或僵硬 | CNS，感官，自主神经 | |
F | 异常运动：痉挛，足尖步态，踏脚，忙碌，低伏 | CNS，感官，神经肌肉 | |
G | 俯卧：不移动，腹部贴地 | CNS，感官，神经肌肉 | |
H | 震颤：四肢以及全身 | CNS，神经肌肉 | |
I | 肌束震颤：背部，肩部，后肢，足部 | 神经肌肉，CNS，自主神经 | |
抽搐（惊厥）：随意肌明显和无意识收缩或惊厥性收缩 | A | 阵挛性抽搐：肌肉收缩和松弛交替性痉挛 | CNS，呼吸衰竭，神经肌肉，自主神经 |
B | 强直性抽搐：肌肉持续性收缩，后肢僵硬性伸展 | ||
C | 强直-阵挛性抽搐：两种类型抽搐交替出现 | ||
D | 昏厥性抽搐：通常是阵挛性抽搐并伴有喘息和紫绀 | ||
E | 角弓反张：僵直性发作，北部弓起，头抬起向后 | ||
反射 | A | 角膜眼角闭合 | 感官，神经肌肉 |
B | 基本反射 | 感官，神经肌肉 | |
C | 正位反射 | 感官，神经肌肉，CNS | |
D | 牵张反射：后肢从某一表面边缘掉下来时收回的能力 | 感官，神经肌肉 | |
E | 光反射 | 感官，神经肌肉，自主神经 | |
F | 惊跳反射 | 感官，神经肌肉 | |
眼睑特征 | A | 流泪 | 自主神经 |
B | 缩瞳 | ||
C | 散瞳 | ||
心血管指征 | A | 血管扩张：皮肤，耳朵，尾巴，结膜，体温高 | 自主神经，CNS，心输出量增加，环境温度高 |
B | 血管收缩：皮肤苍白，体温低 | 自主神经，CNS，心输出量降低，环境温度低 | |
唾液分泌 | 口周围毛发潮湿 | 自助神经 | |
竖毛 | 毛囊立毛肌收缩 | 自助神经 | |
排便 | 固体，肝脏，量少 | 自主神经，便秘，胃肠动力 | |
流动性降低，水样便 | 自主神经，疟疾，胃肠动力 | ||
呕吐 | 呕吐或恶心 | 感官，CNS，自主神经 | |
多尿 | 红色尿 | 肾脏损伤 | |
尿失禁 | 自主感官 | ||
皮肤 | 水肿：组织液体充盈肿胀 | 刺激性，肾脏功能衰竭，组织损伤，长期不动 | |
红斑：皮肤发红 | 刺激性，炎症 |
3.2 技术路线
3.3 试验方案
3.3.1实验器材：注射器、灌胃器、电子天平、鼠笼、烧杯、玻璃棒、鼠笼、注射器。
3.3.2实验试剂：二氧化氯溶液（含量1800mg/L）、苦味酸。
3.3.实验动物：昆明小鼠40只，雌雄各半，体重18g-22g，在通风良好的情况下饲养在20～25℃的动物房中。
3.3.4给药途径：灌胃。小鼠每10g体重0.2mL，每只不超过1mL。
3.4预试验
3.4.1实验试剂：二氧化氯溶液（含量1800mg/L），苦味酸
3.4.2实验器材和设备：注射器1只（1mL）、灌胃器1个、电子天平一台、鼠笼10个、烧杯（50mL1个、100mL1个）、注射器1个（1mL）。
3.4.3实验动物：昆明小鼠20只，随机分五组，每组各4只，雌雄各半，体重18g-22g，在通风良好的情况下饲养在20～25℃的动物房中。观察7天。自由饮水及采食，试验前禁食12h-16h，给药后4h内禁食，但不禁水。
3.4.4给药途径：灌胃。小鼠每10g体重0.2mL，每只不超过1mL。
3.4.5试验方法：
各组不同浓度二氧化氯的配置
组 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
剂量mg/L | 1800 | 600 | 200 | 66.7 | 22.2 |
3.4.6动物称重、编号（苦味酸）、随机分组
3.4.7小鼠灌胃
3.4.8给药后连续观察小鼠14d。给药几小时内应严密观察动物的反应，之后每天上午各观察一次。主要观察并记录小鼠的行为活动、饮食及精神活动，详细记录中毒症状、中毒时间、中毒持续时间以及小鼠死亡时间，食量，饮水量。药前和死亡后以及给药7d后仍存活小鼠体重情况。
3.4.9病例解剖及病理形态学检查：对死亡动物及时进行尸检，仔细记录病理变化情况。
3.4.10实验结束处死所有小鼠。
3.4.11初步得出LD100以及LD0。
3.4.12根据得出的数据安排正式试验计算LD50。
3.5正式试验---LD50的测定
3.5.1实验动物：昆明小鼠50只，雌雄各半，体重18g-22g，在通风良好的情况下饲养在室温20-25摄氏度的鼠笼中。
3.5.2实验器材：注射器1只（1ml）、灌胃器1个、电子天平一台、烧杯（50ml1个、100ml1个）、玻璃棒一个、鼠笼10个。
3.5.3实验药品：二氧化氯溶液（含量1800mg/l），苦味酸
3.5.4给药途径：灌胃。小鼠每10g体重0.1--0.4ml，每只不超过1ml。
3.5.5实验方法：
3.5.6健康动物选择和性别鉴定
3.5.7动物称重、编号、随机分组
3.5.8按照预实验得出的LD100、LD50通过公式一得出组距
3.5.9得出组距后剂量分组
3.5.10给药后连续观察小鼠7d，观察小鼠的行为活动、饮食及精神活动，详细记录中毒症状、中毒事件、中毒持续时间以及小鼠死亡事件。记录给药前以及给药7d后小鼠体质量情况。
3.5.11病例解剖及病理形态学检查：对死亡动物及时进行尸检，仔细记录病理变化情况。
3.5.12实验结束处死所有小鼠。
3.5.13通过观察得出的数据以公式二计算LD50
：最大剂量对数
：各剂量组死亡率之和
四 可行性分析
1 灌胃技术操作简单，且给药后临床反应易于观察到，对于该药的安全性易与检测到。
2本试验内容涉及兽医毒理学相关知识，本人已学习相关课程，有熟练进行试验操作的能力。且所用研究方法为常规试验方法，拥有较纯熟的技术手段。
4. 研究创新点
本试验通过采用小鼠经口灌服给药的方式，检测二氧化氯急性毒性，评价二氧化氯对哺乳动物的安全性，为开发新型二氧化氯消毒剂提供理论依据及数据支持。
5. 研究计划与进展
2018年4月11日购进实验小鼠40只，按组分笼，准备试验
2018年4月12日 -2018年4月14日 小鼠新环境适应期，练习小鼠灌胃，为后续试验做准备。
2018年4月15日 -2018年4月22日 预试验一，用限度实验预测二氧化氯溶液ld50
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