1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
裂谷热(rift valley fever, rvf)是由裂谷热病毒(rift valley fever virus, rvfv)引起的由节肢动物传播的一种急性、发热性人兽共患传染病。
1930 年,在肯尼亚大裂谷地区的一次绵羊暴发性疾病调查中首次分离到rvfv[1]。
本病主要流行于非洲地区,主要感染反刍动物,可引起怀孕动物流产及新生动物死亡;人类对本病普遍易感,严重者可引发死亡。
2. 研究的基本内容和问题
一 研究目标:本实验旨在原核表达出裂谷热结构蛋白(np蛋白),用表达的重组蛋白免疫山羊,获得阳性血清。
同时用表达的重组蛋白免疫小鼠,并对其进行特异性鉴定和效价检测。
通过条件优化建立诱导np蛋白原核表达的最佳条件,经sds-page与western blot鉴定其抗原性,并制备np蛋白表达的多克隆抗体,进而测试抗体反应特异性。
3. 研究的方法与方案
1. 研究方法将本实验室保存的重组表达质粒 pet-28a-np(由公司合成制备),转化至大肠杆菌bl21感受态细胞并进行诱导表达,分别用sds-page 和 western blot鉴定重组表达蛋白。
用his亲和层析柱纯化重组蛋白。
用表达的np蛋白免疫balb/c小鼠和山羊。
4. 研究创新点
创新之处1.表达NP蛋白,建立可用于裂谷热病毒抗体检测的ELISA方法。
2. 制备多克隆抗体用于建立快速准确便捷的ELISA检测方法,提高检测的特异性。
5. 研究计划与进展
研究计划2017年8月:重组蛋白的表达和纯化2017年8-10月:免疫BALB/c小鼠与山羊;2017年10-11月:免疫后小鼠、山羊抗体效价的测定,通过Western Blot鉴定多克隆抗体特异性;2018年3-4月:总结分析,撰写毕业论文。
预期进展1.表达出正确的重组裂谷热病毒NP蛋白2.制备出针对重组裂谷热病毒NP蛋白的多克隆抗体
课题毕业论文、文献综述、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。