裂谷热病毒NS蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

裂谷热病毒 （rift valley fever virus，rvfv）属于布尼亚病毒科白蛉病毒属，是一种负链 rna 病毒，基因组包含 l、m、s 3 个节段[1]。

大片段(l)编码的rna依赖性rna聚合酶。

中片段(m)编码囊膜糖蛋白g1和g2以及非结构蛋白质14k和78k。

2. 研究的基本内容和问题

一 研究目标用原核表达系统表达出裂谷热病毒的ns重组蛋白。

用表达的重组蛋白免疫山羊，获得阳性血清。

同时用表达的重组蛋白免疫小鼠，取免疫后小鼠的脾脏内的b淋巴细胞与骨髓瘤细胞sp2/0融合制备单抗，并对其进行鉴定和elisa检测。

3. 研究的方法与方案

一、研究方法将本实验室保存的重组表达质粒 pet-28a-ns（由公司合成制备），转化至大肠杆菌bl21感受态细胞并进行诱导表达，分别用sds- page 和 western- blot 鉴定重组表达蛋白。

用his亲和层析柱纯化重组蛋白。

用表达的ns 蛋白免疫 balb/ c 小鼠和山羊。

4. 研究创新点

1．表达非结构蛋白NS建立可鉴别野毒感染与灭活疫苗免疫的抗体检测方法。

2. 制备单克隆抗体用于建立阻断ELISA方法，提高检测的特异性。

5. 研究计划与进展

一、研究计划2017年8-9月：重组NS的表达及纯化鉴定，免疫BALB/c小鼠与山羊；2017年10-11月：免疫后小鼠抗体效价的测定以及细胞融合、亚克隆与检测；2017年12-2018年1月：单克隆抗体的鉴定与检测；2018年3-4月：总结分析，撰写毕业论文。

二、预期进展1.表达出正确的重组裂谷热病毒NS蛋白2.制备出针对重组裂谷热病毒NS蛋白的单克隆抗体3.制备出针对重组裂谷热病毒NS蛋白的多克隆抗体