PRRS病毒N蛋白的截短表达与鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

意义 ：本课题的开展可以为prrs病毒n蛋白的相关研究提供参考依据，可对进一步研究prrs病毒n蛋白与宿主蛋白的互作位点以及n蛋白的功能提供基础。

通过本课题的实践可以熟练掌握质粒的构建，western blot，免疫荧光技术等其他一系列相关的操作技能，为今后的研究工作打下基础。

国内外研究概况：猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,prrs）是上个世纪80年代末出现的一种危害世界养猪业的病毒性传染病，主要引起母猪的繁殖障碍和其它各年龄猪的呼吸道症状以及仔猪的高死亡率，俗称蓝耳病。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：构建PRRS病毒N蛋白的截短质粒并鉴定其真核表达情况研究内容：①PRRS病毒截短的N蛋白的各个片段的扩增②PRRS病毒截短的N蛋白真核表达质粒的构建③真核表达质粒的鉴定拟解决的关键问题：对PRRS病毒N蛋白进行截短，鉴定其表达结果，寻找N蛋白与宿主蛋白互作的关键氨基酸位点。

3. 研究的方法与方案

研究方法：基因片段的扩增（聚合酶链式反应，琼脂糖凝胶电泳）、酶切与连接、转化（细菌的培养，挑菌鉴定）、质粒的提取（中提质粒）、hek293细胞的传代培养、转染、western bolt及免疫荧光技术。

实验方案及技术路线： （见附件）可行性分析：本课题思路设计合理，各项实验技术手段成熟，实验设备齐全。

本人对课题所涉及的动物病毒分子生物学，兽医微生物学，动物免疫学等学科的相关内容有一定的学习，并已基本掌握相关的实验技术。

4. 研究创新点

特色或创新之处本课题在前人的研究基础上，依据N蛋白氨基酸的结构域及其功能，将其截短，分别构建质粒，在真核表达载体上表达及鉴定。

5. 研究计划与进展

时间段 内容 具体项目 预期进展2015.3.2～2015.3.8 准备工作 确定毕业设计题目 熟悉实验室环境，确定题目，完成开题报告。

撰写开题报告 熟悉实验室环境 2015.3.9～2015.3.15 片段的扩增 设计引物 获得扩增的片段，鉴定为阳性并将其回收。

扩增基因片段 扩增产物的鉴定及回收 2015.3.16～2015.3.22 酶切与连接 扩增产物的酶切与回收 获得连接产物，鉴定为阳性并将其回收。