Rab8在卵母细胞中的表达和功能开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

卵母细胞减数分裂最显著的特征之一，便是不对称分裂，在此过程之中，卵母细胞将其一半的染色体保留在排出的极体中。在哺乳动物卵母细胞成熟的不均等分裂过程中，主要涉及两个事件，包括纺锤体的组装、定位，以及皮层极性的建立。微丝的动态变化对纺锤体迁移到皮质区，以及卵母细胞的极性建立有重要的意义，其以此来确保不对称分裂减数分裂过程^[1]。微丝蛋白动态过程中任何的错误都可能导致非整倍体卵子的产生，而非整倍体卵子是导致生殖障碍和发育障碍的重要因素^[2]。

rab蛋白是小gtp酶家族中参与细胞内囊泡运输的关键蛋白^[3]。他们同小gtp酶家族中ras亚家族一样可以进行非活性（gdp结合）和活性 （gtp结合）形式的转变^[4]。到目前为止，人类已经发现了超过60个小gtp酶家族成员。许多生物过程涉及rab蛋白，包括囊泡融合，内循环，胞质分裂和膜贩运^[4,5,6]。rab35已被证明是一个能够在胞吞活动中调控f-actin的重要蛋白^[4]。此外有报道显示，rab6a在小鼠卵母细胞减数分裂过程中微丝帽形成中是必不可少的^[7]。

rab8是rab蛋白家族成员,包含206个氨基酸残基,包括gtp结合、水解所必需的5个高度保守区域,其相对分子质量约为24000,主要分布在反面高尔基体网络和基底面细胞质膜,以及两者间负责运输的囊泡上^[8]。此外，研究发现rab8在哺乳动物细胞中有rab8a和rab8b两种不同亚型。这两个异构体由不同的基因编码，rab8b主要存在于在脑、睾丸、心脏等器官，而rab8a在体内各个器官中分布广泛。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标

探索rab8在卵母细胞减数分裂过程中极体排出以及对高尔基体功能的影响。

2.研究内容

3. 研究的方法与方案

1.研究方法

（1）取小鼠卵母细胞，实验组注射 rab8sirna，对照组注射胚胎水，在有ibmx的培养液中抑制22-24小时后，再放在新鲜的培养液中培养12个小时，统计卵母细胞第一极体排极体率。

（2）取小鼠卵母细胞，对照组注射胚胎水，实验组注射 rab8sirna，在有ibmx的培养液中抑制22-24小时后，再放在新鲜的培养液中培养8个小时，通过免疫荧光染色观察微丝在细胞中的亮度，并统计实验组和对照组的微丝荧光强度差别。

4. 研究创新点

到目前为止，人类已经发现了超过60个小GTP酶家族成员。许多生物过程涉及Rab蛋白，包括囊泡融合，内循环，胞质分裂和膜贩运。Rab35已被证明是一个能够在胞吞活动中调控F-actin的重要蛋白。此外有报道显示，RAB6A在小鼠卵母细胞减数分裂过程中微丝帽形成中是必不可少的。人们已经对Rab8有了一定的认识与研究，但Rab8在小鼠卵母细胞减数分裂过程中的潜在功能尚未阐明。故本课题将在已有的研究基础之上对其在细胞骨架及其细胞器上功能进行探究，以探索Rab8a在卵母细胞发育中的作用。

5. 研究计划与进展

2018年12月～2019年01月：练习并掌握卵母细胞的采集以及体外成熟培养，免疫荧光染色及激光共聚焦等技术手段的操作。

2019年03月～2019年04月：完成全部主体实验

2019年05月：毕业论文撰写，并准备答辩等相关事宜。