新型壳聚糖酶的制备及性质研究开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

文 献 综 述1.课题的研究意义和应用价值壳聚糖(chitosan)是由几丁质脱乙酰化得到的一种线性多糖，通过β-1,4-糖苷键连接2-乙酰氨基-2-脱氧-β-d-毗喃葡萄糖和2-氨基-2-脱氧-β-d-毗喃葡萄糖而成[1]。

壳聚糖中含有相当不稳定的糖苷键，其糖苷键断裂可得到具有可变聚合度的壳聚糖寡聚体[2]。

研究发现，壳聚糖降解得到的壳寡糖(chitooligosaccharides,cos)具有分子质量小、溶解性好、易被机体吸收、无毒副作用等优点,且壳寡糖具有免疫调节、抗炎、抗菌、抗肿瘤、神经保护、降血脂等功效，因此壳寡糖在保健食品、生物医学、化妆品、化工、农业等多个领域发挥巨大作用[3]。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

1本课题拟采用的技术路线：（图如附件）2课题研究方法：本课题的主要研究内容包括两个部分：2.1 对壳聚糖酶进行重组表达、纯化、底物选择性等酶学性质的表征：通过对获得的菌株进行鉴定后提取其基因组dna进行pcr扩增获得新型壳聚糖酶的全长基因序列。

利用基因克隆表达技术在大肠杆菌中表达获得新型壳聚糖酶。

构建毕赤酵毋高效表达体系，将上述筛选得到的壳聚糖酶基因去除信号肽后，利用基因克隆表达技术在pichia pastoris gs115中高效表达，经分批补料培养的方式高密度发酵高效表达重组壳聚糖酶，发酵过程中测定细胞生长、蛋白表达量以及发酵产物酶活变化趋势来监测发酵情况，发酵产物壳聚糖酶经q-sepharose fast flow强阴离子交换柱纯化，对纯化后的重组蛋白进行生化性质的表征和水解机制的研究。