野菊花黄酮类成分体外抗炎作用的研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.本课题意义 野菊花为菊科植物野菊(chrysanthemum indicum l.)的干燥头状花序[1]。

现代药理研究表明，野菊花具有降血压、扩张冠状动脉、防止冠脉粥样硬化等作用[2]，除此之外，它还能防治感冒，治疗宫颈炎、呼吸道炎症等病症[1]。

本研究对不同产地野菊花的抗炎作用进行比较分析，比较成分差异，并综合评价野菊花的品质。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标（1）探究不同地区野菊花黄酮类成分含量差异；（2）比较不同地区野菊花抗炎生物活性的差异；（2）分析野菊花产地与黄酮含量以及抗炎功能的联系。

2.研究内容 本研究拟以不同地区药用野菊花的干燥头状花序作为研究对象，利用超声提取其黄酮类成分，分析其含量差异；并通过体外实验的方法测定其对黄嘌呤氧化酶的抑制情况，寻找黄酮含量以及抗炎活性高的野菊花产地居群。

3.拟解决的关键问题（1）提取各产地野菊花的黄酮类成分，并测定其含量；（2）测定野菊花醇甲醇提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制率；（3）分析野菊花的地理居群与黄酮含量以及抗炎能力的相关性。

3. 研究的方法与方案

1.研究方法本研究拟对不同地区野菊花通过体外实验的方法探究其抗炎生物活性的差异。对不同浓度的醇提取物成分进行对黄嘌呤氧化酶的抑制情况分析。

2.技术路线

3.实验方案3.1甲醇提取 称取2 g野菊花粉，以130的的料液比，加入甲醇溶液，于60℃恒温超声提取45 min，提取两次，合并滤液。将甲醇提取液用旋转蒸发仪减压浓缩，旋转蒸发得到野菊花甲醇提取物浸膏。3.2野菊甲醇提取物的总黄酮含量测定 采用亚硝酸钠-硝酸铝比色法精密吸取芦丁对照液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分别置10 ml量瓶中，加5亚硝酸钠溶液0.3 ml，振荡摇匀，放置6 min，加10硝酸铝0.3 ml，振荡摇匀，放置 6 min，再加 4氢氧化钠溶液4ml，振荡摇匀，用 30甲醇定容至刻度，振荡摇匀，放置15 min后采用紫外分光光度法置比色皿中在510 nm处测定吸光值，以芦丁浓度(mg·ml-1)为横坐标，吸光值为纵坐标。绘制标准曲线，计算测定总黄酮含量所用的芦丁的线性关系。同样，利用上述方法测定不同产地野菊花甲醇提取物中总黄酮的含量。3.3野菊醇提物的抗炎活性测定 精密称取以上各提取物适量用dmso溶解备用，反应体系总体积为200μl，反应时先依次向96孔板加入缓冲液20μl、样品20μl，酶液80μl，在酶标仪内37℃孵育3min，之后加入底物黄嘌呤80μl，启动反应，立即在295 nm处记录吸收度值(每隔30s一次)，共计6 min。本实验设置样品组(加样品、底物和酶)、酶组(加底物和酶但不加样品)、空白组(只加底物和样品不加酶)和阳性对照组 (别嘌呤醇)。抑制率()用下列公式计算：抑制率()(Δa酶－Δa样品)/(Δa酶－Δa空白)×100。其中Δa指一定时间内吸光度的差值。根据以上初筛结果，将活性较好的样品制备5个系列浓度以考察量效关系，并通过graphpad prism5软件计算其ic50。3.4 野菊产地与黄酮及抗炎活性相关性分析 利用相关性分析软件分析野菊花的产地与黄酮含量以及抗炎活性的相关性，阐明野菊高品质形成的原因。

4. 研究创新点

本研究采用了体外实验的研究方法，拟对野菊花各种可能的抗炎活性成分进行醇提取，并采用数学方法分析其活性成分对黄嘌呤氧化酶的抑制情况与抑制机制。

整项研究采用了多种现代仪器分析方法和研究手段，对中药材的活性成分的抗炎机制开展研究，具有较好的创新性。

5. 研究计划与进展

本研究计划在2019.09-2020.05完成：（1）2019.09-2020.01：对各个不同地区的野菊花进行甲醇提取分析，并测定其总黄酮含量，分析黄酮含量与产地的联系。

（2）2020.01-2020.03：通过体外实验探究各地野菊花抗炎生物活性的差异，并推测活性与产地的联系。

（3）2020.03-2020.05：实验数据处理并撰写研究论文。