链格孢菌粗毒素对菊花幼苗生理代谢的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

课题意义菊花为我国十大名花及世界四大切花之一，兼具观赏、药用、食用等多重价值。

在生产实践中，菊花病害发生普遍且为害严重，导致菊花品质大幅下降从而带来经济损失[1]。

黑斑病是菊花常见的重要病害之一，在温室周年生产、露地重茬连作以及脚芽夏插时，发病极其严重，适宜的温湿条件更可导致菊花叶片枯焦脱落，轻则影响植株生长、开花，重则全株枯死，对菊花产量、经济价值影响很大。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标本实验主要目标是黑斑病病原菌链格孢菌对菊花幼苗生理指标的影响。

通过获得粗毒素，使之侵染菊花幼苗，从生理方面研究病原菌的毒素处理后的变化规律，更加完善链格孢菌的致病机理，完善该毒素的作用范围，进一步探索该毒素的开发前景，以便为生产服务。

研究内容（1）链格孢菌产毒能力的培养、粗毒素提取方法链格孢菌毒素产生与培养条件关系很大。

3. 研究的方法与方案

拟采取的研究方法于2014年6月至2014年8月在南京农业大学生科楼实验室中先培养病原菌链格孢菌，再进行粗毒素的提取。

将获取的5-8cm的菊花幼苗定植于塑料杯中，采用基质培，将粗毒素进行不同浓度的处理，采用幼苗浸渍法使毒素侵染菊花幼苗。

生长指标用直尺、游标卡尺、天枰测量；生理指标细胞膜透性的测定用电导仪测定根系组织浸出液的电导率，用蒽酮法测定可溶性糖含量，用酸性茚三酮法测定脯氨酸酶活性。

4. 研究创新点

关于链格孢菌对于植物影响的实验多是采用活菌种侵染植物，近些年来的实验在前人的基础上加入了毒素提取这一个步骤，以往由于菌种活性过剩，往往在很短的时间内就会造成被侵染植物的死亡，使用于植物理化性质测量的时间十分紧张，再加入粗毒素的提取之后，由于侵染植物的不再是活菌，毒素的数量不会随着植物的培养而增加，反而会减少，可以使我们在测量被侵染植物理化性质的时候有充足的时间，但是我们在实验过程中也要注意，不要让背侵染植物的培养基中的毒素数量过少，这样会起不到侵染植株的作用；在粗毒素提取之后，有相应的毒素的提纯，一般的方法是湿筛法，由于实验器材的缺失，我们采用的是离心提纯法。

5. 研究计划与进展

2014.2-2014.3 查阅相关文献，确定试验方案和技术路线；2014.3-2014.5 进行相关的试验，培养菌种及粗毒素的制备；2014.5-2014.6进行菊花幼苗的栽培及病原菌侵染，观察植株变化；2014.6-2014.8 测定菊花幼苗的相关生理指标的变化；2014.8-2015.3 试验数据分析，阅读大量文献，撰写毕业论文。

预期研究成果（1）了解链格孢菌产毒能力及所需培养条件，为毒素的大量制备提供条件；（2）粗毒素的提取方法及致病范围的研究，能够提纯毒素；（3）弄清致病菌对菊花幼苗致病机理。