氯噻啉免疫层析分析方法研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

农药在环境和食品中的残留，不仅对人类健康造成了长期的潜在危害，而且对我国农产品的出口产生了巨大的冲击。现代社会人们对于环境的要求越来越高，对高效低毒的绿色农药的需求也越来越迫切。新烟碱类杀虫剂是继有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类杀虫剂之后的第四代杀虫剂。由于其具有低毒靶标独特、应用方法多样等特点，使得它们成为农业生产中具有广泛用途的一类杀虫剂。

氯噻啉是江苏省南通市江山农药化工股份有限公司自行研制开发的一种新烟碱类杀虫剂，作用于烟酸乙酰胆碱酯酶受体的新烟碱类内吸性杀虫剂，可用于防治吮吸式口器害虫，如蚜虫、叶蝉、飞虱、蓟马、粉虱及其抗性品系，同时对鞘翅目、双翅目和鳞翅目害虫也有防效，尤其对水稻二化螟、三化螟的毒力比其他烟碱类杀虫剂高，广泛应用于水稻、小麦、蔬菜、烟草、果树、茶树等作物上，具有高效、光谱、低毒等优点。作为高毒农药的代替品种，氯噻啉的使用量日益上升，且随着人们对食品安全关注程度的增强，对其在农产品和环境中残留检测方法的研究也已广泛开展[1,2]。

目前，对氯噻啉残留的检测主要依赖高效液相色谱法(hplc)。贺敏等[3]建立了水稻中氯噻啉残留的分析方法，在稻田水、茎叶、稻壳和土壤中的最低检测浓度分别为0.0004、0.01、0.02和0.005mg/kg;张丽芬[4]建立了甘蓝中氯噻啉残留的分析方法,其最低检测浓为3.2mg/kg。由于常规仪器分析方法难以满足大批量样品的检测，因此开发高效、快速、灵敏的检测方法显得十分必要。农药残留的快速检测方法有很多，其中免疫学技术在农药残留检测中的发展较快，应用也逐渐广泛起来。它具有灵敏、快速、特异性强、分析容量大、安全可靠等优点，非常适宜于复杂基质中痕量组分的分析和现场快速检测[5]。金标试纸条免疫层析分析方法（goldimmunochromatographicassay，gica）是以胶体金作为标记物，在免疫层析的基础之上建立的一种简单快速的免疫学检测技术，其核心技术包括胶体金的制备、胶体金与抗体的标记、试纸条组装和试纸条的调试优化。该技术具有快速简便、结果可以肉眼判读、无需复杂操作和仪器设备、便携可实现现场检测的诸多优势，成为免疫检测领域发展的重要方向，已经在临床诊断和食品环境检测方面得到广泛的发展，并且许多试纸条已经实现商品化[6]。李明等[7]建立的了噻虫胺免疫层析快速检测试纸条，但目前未见试纸条免疫层析分析用于检测氯噻啉的报道。本研究首次利用了氯噻啉单克隆抗体，结合生物素-链霉亲和素的金增强，建立了可快速灵敏地检测氯噻啉的免疫层析分析方法。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：

利用实验室制备的特异性单克隆抗体以及合成的胶体金，制备能够检测氯噻啉的免疫层析试纸条，并建立免疫层析分析方法。

研究内容：

3. 研究的方法与方案

1.胶体金的制备

采用柠檬酸三钠还原氯金酸的方法制备不同粒径的胶体金溶液，颗粒直径的大小可以通过加入柠檬酸三钠的量来控制，并于-4℃保存。

2.不同粒径的胶体金与蛋白的偶联

4. 研究创新点

本课题以氯噻啉为研究对象，通过亲和性高和稳定性好的生物素-链霉亲和素系统对胶体金免疫检测试纸条的检测信号放大，实现检测敏感性的提高。该检测方法不需要其它检测设备，在10min内即可完成结果的判读，易于商品化，为氯噻啉的残留检测提供快速、灵敏、可靠的技术手段。

5. 研究计划与进展

2015年8月--9月胶体金的制备

2015年9月--10月胶体金与抗体、链霉亲和素的标记

2015年11月--12月金增强试纸条组装和试纸条的调试优化。

2015年12月配制氯噻啉标准样品，进行灵敏度、特异性和添加回收率的测定，记录数据。