甜菜夜蛾细胞色素b5还原酶的克隆和分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1、甜菜夜蛾的生物学特性及抗药性发展概况

甜菜夜蛾（spodopteraexiguahbner）隶属于鳞翅目夜蛾科，可以取食35科108属138种植物，主要为害十字花科蔬菜[1-3]。其年发生代数因地区而变化，在我国深圳一年发生10-11代[4]，福建8-10代(方文杰等，1998)，陕西关中4-5代，世代重叠[5]。甜菜夜蛾一个世代经历卵，幼虫，蛹和成虫四个时期，约2830天。

甜菜夜蛾最早在亚洲南部地区发现，目前在世界上广泛分布于热带和温带地区[6]。甜菜夜蛾在我国的发生范围已遍及20余个省，市，自治区，成为制约我国农业生产发展的主要害虫之一[7]。

上世纪60年代到70年代，甜菜夜蛾就已对ddt和有机磷类药剂产生了抗药性。90年代末以来，甜菜夜蛾对昆虫生长调节剂的抗性也逐渐表现出来。国内自20世纪80年代以来，全国各地相继有很多地方的甜菜夜蛾对多种药剂产生了不同程度的抗药性。2000年，王开运等用点滴法测定甜菜夜蛾泰安种群对顺式氯氰菊酯和毒死蝉的抗性，发现其抗性分别为153.59倍和164.1倍，均达到极高抗水平[8-9]。甜菜夜蛾对杀虫剂的抗性水平因药剂种类，地区及使用时间，强度，频率等的不同而异。长时间，高剂量的使用一种或者同类杀虫剂可以使甜菜夜蛾对其产生很高的抗性，从而导致防治失败。

2. 研究的基本内容和问题

1、研究目标

甜菜夜蛾是一种世界上广泛分布的重要农业害虫，其危害严重且抗药性问题日渐突出，但是关于该虫的细胞色素b5还原酶基因方面的研究并不是很多，鉴于b5还原酶在昆虫降解代谢内源和外源化合物，对农药产生抗药性等方面的重要作用，本论文在甜菜夜蛾细胞色素b5还原酶基因的克隆，基因的时空表达及诱导表达等方面进行了研究，为探明细胞色素b5还原酶在甜菜夜蛾生长发育，环境适应性以及降解代谢化合物等方面的作用奠定基础。

2、研究内容

3. 研究的方法与方案

2、实验可行性分析

本实验依托南京农业大学植物保护学院昆虫生理生化与分子生物学实验室为平台，指导老师赵春青副教授一直从事相关方面的研究，实验室长期从事昆虫抗性相关的研究，相关实验仪器、实验技术、方法十分成熟，实验室大部分学生都拥有饲养甜菜夜蛾的经验并且有充足的虫源和养虫房，且有过多次相似的科学研究，经验丰富，理论和实验操作的相关准备充足，可行性较大。

4. 研究创新点

特色或创新之处

甜菜夜蛾抗药性问题日渐突出，但是关于该虫的细胞色素b5还原酶基因方面的研究并不是很多，鉴于细胞色素b5还原酶在昆虫降解代谢内源和外源化合物，对农药产生抗药性等方面的重要作用，本论文在甜菜夜蛾细胞色素b5还原酶基因的克隆，基因的时空表达及诱导表达等方面进行了研究，为探明细胞色素b5还原酶在甜菜夜蛾生长发育，环境适应性以及降解代谢化合物等方面的作用奠定基础。

5. 研究计划与进展

本实验以甜菜夜蛾为研究对象，从甜菜夜蛾中提取总RNA，并通过TR-PCR等技术获取cDNA，通过RACEPCR等技术得到甜菜夜蛾细胞色素b5还原酶基因全长，将得到的全长基因在甜菜夜蛾体内进行时空表达，测定基因的诱导表达情况。