HOPS复合体蛋白FgVps41在小麦赤霉病菌生长发育及致病过程中的功能研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

小麦是我国重要的麦类作物，其种植面积和产量仅次于水稻，为我国第二大粮食作物。病害的危害一直严重影响着麦类作物的生产。我国发生较重的麦类病害有20余种，其中赤霉病、白粉病和纹枯病是长江中下游小麦上的三大病害，以赤霉病的流行频率最高、所致损失大。感染赤霉病的麦穗，受害程度轻重不一，初在小颖上出现水渍状、淡褐色病斑，在条件适合条件下迅速扩展至整个穗部，失水后即白穗，发病后一般可减产10%~20%，严重的达80%~90%，甚至颗粒无收。病麦粒还含有毒素对人和牲畜都有毒害作用。

由于基因克隆，遗传转化等分子生物学方法与技术的应用，对赤霉菌功能基因的克隆、鉴定、异源表达及其表达调控等分子生物学研究取得了很大进展。禾谷类基因组全序列的完成，为我们了解他的致病过程提供了遗传基础，所以对这些基因在遗传、生化和分子生物学分析，将有助于我们对禾谷镰刀菌早期致病过程有更加深入了解，从而为我们设计新的病害防治提供理论基础。

参考文献

2. 研究的基本内容和问题

1、研究目标：解析fgvam7结合蛋白fgvps41在小麦赤霉病菌生长发育、致病过程及毒素合成中的生物学功能。

2、研究内容：采用酵母双杂交技术验证fgvps41与fgvam7的互作关系；利用同源重组原理构建fgvps41编码基因敲除载体；利用原生质体转化技术获得基因敲除突变体和互补菌株；分析突变体的生物学表型，包括营养生长、无性繁殖、有性生殖、对外界胁迫应答、致病性、毒素产量等，最终阐明fgvps41在小麦赤霉病菌生长发育、致病过程及毒素合成中的生物学功能。

3、拟解决的关键问题：利用peg介导的原生质体转化方法获得fgvps41编码基因敲除突变体。

3. 研究的方法与方案

1、研究方法

采用酵母双杂交技术、同源重组原理、原生质体转化技术等方法验证fgvps41与fgvam7的互作关系，构建敲除载体并获得突变体。分析突变体的生物学表型，最终阐明fgvps41在小麦赤霉病菌生长发育、致病过程及毒素合成中的生物学功能。

1、技术路线

4. 研究创新点

通过鉴定结合蛋白、阐明结合蛋白的生物学功能，从而深入解析FgVam7的分析调控机制。

5. 研究计划与进展

201509-201512构建敲除载体，并进行原生质体转化，获得敲除突变体；

201601-201603对获得的突变体进行表型分析；

201604-201605整理实验数据，撰写研究论文。