水稻黄单胞菌水稻致病变种转位子蛋白的鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

许多对植物和动物产生致病性的革兰氏阴性菌通过Ⅲ型分泌系统（type Ⅲ secretion system, t3ss）将效应蛋白（effector protein）转运到真核宿主的细胞中（ji and dong, 2015)。

iii型分泌系统是一种由细菌编码的毒力注射装置，连接细菌的外膜和寄主的细胞膜（matte et al., 2011）。

该装置由至少20种不同的蛋白组成，其核心是一个多环型基座和针头状突起组成的针状复合体。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：研究水稻黄单胞菌水稻致病变种(xanthomonas oryzae pv.oryzae,xoo)pxo99a Ⅲ型分泌系统转位子（translocon）的蛋白组成。

研究内容：1.筛选候选编码转位子蛋白的基因：hpa1，hrpb1，hpa4。

考虑其蛋白与hrpf的互作关系。

3. 研究的方法与方案

研究方法包括：蛋白质印迹法（western blot)；免疫共沉淀（co-ip)；蛋白质谱分析（esi)；酵母双杂交系统（yeast two-hybrid systerm)。

技术路线：1.酵母双杂交验证hrpf与hrpb1，hpa4互作关系；hpa1与hrpb1，hpa4互作关系。

具体见附件2.co-ip技术寻找与hrpf互作的蛋白。

4. 研究创新点

实验室前期预测harpins中的hpa1蛋白为稻黄单胞菌水稻致病变种Ⅲ型分泌系统转位子组成蛋白之一，但酵母双杂交实验得出hpa1与hrpf不互作，即猜想两者之间可能通过某一种未知蛋白间接互作。

以此为依据，本课题选择co-ip技术找出与hrpf互作的蛋白，进而对以上猜想进行验证。

同时，实验室筛选出可能与hrpf互作的pxo99a胞外蛋白hpa4，hrpb1。

5. 研究计划与进展

2015.9-2015.10 构建PHM1::hrpF表达载体2015.10-2015.11 将表达载体转入PXO99A中，诱导HrpF表达，Western Blot验证2015.11-2015.1 1.CO-IP找出HrpF互作蛋白，质谱分析检测2.酵母双杂交研究HrpF与HrpB1，Hpa4互作关系