OsAGO18在稻瘟病抗性中作用的研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

意义 水稻（oryzae sativa）是目前世界上最重要的粮食作物之一，稻瘟病是由稻瘟病菌(magnorporthe oryzae)侵染水稻引起的一种重要的病害，严重影响了水稻的产量。

目前对稻瘟病的控制主要是依靠传统的育种手段，但是许多抗性品种在两到三年内就会失去抗性。

而对稻瘟病的研究多数集中在对稻瘟病菌的营养生长、无性繁殖、附着胞形成、以及菌丝发育机制等方面，对调控水稻与稻瘟病菌互作的水稻基因的认识还相对有限。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：实验计划首先应用genotyping鉴定、筛选出在正确位点单插入的纯合体ago18突变体植株；然后使用guy11、js153、98-06三种稻瘟病菌侵染ago18突变体与野生型npb，比较分析ago18突变体与野生型npb的表型；使用rt-pcr检测相关报告基因，对osago18基因在稻瘟病抗性中的功能进行预测及分析，得出结果。

研究内容：（1）培育突变体种子，提取突变体和野生型植株dna，genotyping鉴定、筛选出在正确位点单插入的纯合体ago18突变体植株；（2）分别喷雾接种guy11、js153、98-06三种稻瘟病菌，对比观察ago18突变体和npb表型；（3）分别提取三种稻瘟病菌侵染突变体和野生型植株的rna（0h、144h），rt-pcr检测相关报告基因，初步推测osago18基因在稻瘟病抗性中的功能；拟解决的关键问题：1 、分析osago18是否参与水稻对稻瘟病菌的抗病性。

2 、分析osago18基因在稻瘟病抗性中的作用机理，是否参与sa、ja或pti、eti等其他信号通路。

3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析研究方法：1.培育ago18突变体与npb，提取dna，运用genotyping鉴定筛选出单插入纯合体。

2.对ago18突变体与npb分别喷雾接种guy11、js153、98-06三种稻瘟病菌，对比ago18突变体与npb的表型。

3.分别提取ago18突变体与npb在受三种稻瘟菌侵染0h与144h时的rna。

4. 研究创新点

特色或创新之处1、单插入位点纯合突变体较难获得，本项目拟通过相关的分子生物学技术筛选、鉴定出单插入位点纯合的ago18突变体，在南京农业大学牌楼种植基地进行培育和扩繁获得较多二代纯合体植株。

2、当前在模式植物拟南芥中ARGONAUTE蛋白研究体系较完善，而在水稻对稻瘟病的抗性研究中较少，本实验从表型到基因展开研究，实验思路清晰，借鉴拟南芥中研究体系与实验思路，可以较快捷、完善设计实验，加快实验进度。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展2015年8月-2015年10月：培育ago18突变体与npb，提取dna，运用genotyping鉴定筛选出单插入纯合体。

2015年10月-2015年12月：guy11、js153、98-06稻瘟病菌侵染突变体和野生型2016年1月-2016年2月：分别提取三种稻瘟病菌侵染后0h、144h的突变体和野生型植株rna，检测相关报告基因。

2016年3月-2016年4月：结合ago18突变体与npb的表型和相关报告基因预测osago18在稻瘟病抗性中的作用；撰写研究论文。