表观遗传调控因子OsNRPE1b与OsRDM1蛋白互作验证开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

课题意义： rna介导的dna甲基化（rddm）途径是植物介导重复序列、转座子等序列dna甲基化，维持基因组稳定的重要机制。

rddm途径主要依赖于两种非编码rna：依赖于dna的rna聚合酶pol iv产生的24nt sirna和依赖于dna的rna聚合酶pol v转录出来的基因间的非编码rna。

在典型的rddm途径中，pol iv介导的sirna的合成过程主要是：在shh1/dtf1，clsy1与dms4蛋白的帮助下，pol iv转录出单链rna(ssrna)，而单链rna在rdr2的作用下形成双链rna（dsrna），随后双链rna被dcl3切割成24nt sirna，再经hen1甲基化修饰后，装载到ago4蛋白中。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：通过split-luc来验证水稻中osnrpe1b与osrdm1是否和拟南芥中nrpe1与rdm1一样存在相互作用的关系,探究水稻中rddm作用机制。

研究内容：（1）利用进化树分析osnrpe1b和osrdm1基因与拟南芥中nrpe1和rdm1基因的亲缘关系远近。

（2）osnrpe1b-nluc和osrdm1-cluc载体的构建。

3. 研究的方法与方案

研究方法：本实验拟通过split-luc这种实验方法来验证水稻中osnrpe1b与osrdm1是否和拟南芥中nrpe1与rdm1一样存在相互作用的关系。

技术路线：实验方案：（1） 进化树分析osnrpe1b与osrdm1基因（2） 克隆osnrpe1b与osrdm1基因（3） 构建osnrpe1b-nluc和osrdm1-cluc载体（4） osnrpe1b-nluc和osrdm1-cluc载体转化农杆菌（5） 注射烟草，分析结果可行性分析：（1） 技术方法可行。

该方案所采用的技术方法我们都已掌握，完全可以进行此项工作。

4. 研究创新点

特色或创新之处： RdDM发生机制的研究在拟南芥中已取得重大进展，并逐渐被人们所认识，但这些研究主要集中于模式植物，普通植物的甲基化发生机制仍缺乏研究。

水稻中RdDM作用机制所知甚少。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展2016年7月-10月：RdDM作用机制及Split-LUC技术的理论学习；2016年10月-2017年2月：克隆基因，构建载体，注射烟草；2017年2月-4月：整理数据，撰写毕业论文