1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
课题研究意义:截形叶螨属蛛形纲蜱螨目叶螨科,为害棉花、枣树、玉米及豆类等作物,是一种世界性重要的农业害虫。
它的体积小,生活隐蔽,不易直接进行观察,难以在其发生早期发现并进行防治[1]。
该螨繁殖能力强,可以在植物的一个生长季节中发生多代,难以进行控制,一旦防治失时便会造成巨大损失,所以农户使用化学农药的频率和强度增加,这导致截形叶螨极易对药剂产生抗药性[2]。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标:研究v-atpase对截形叶螨生殖的影响及对v-atpase基因进行沉默在该螨防治中的可能应用价值。
研究内容:结合rnai技术对截形叶螨v-atpase基因进行沉默,检测截形叶螨的产卵量和卵孵化率。
拟解决的关键问题:探究截形叶螨中v-atpase在生殖方面的影响,探索防治截形叶螨的新方法。
3. 研究的方法与方案
研究方法:通过人工培育获得一个单雌系,然后利用近缘物种二斑叶螨的dna序列设计引物扩增截形叶螨的cdna得到v-atpase基因,利用试剂盒方法在体外表达合成v-atpase基因的dsrna,使用含v-atpase基因dsrna的溶液浸泡静Ⅲ期截形叶螨24h,将处理过的虫子转移至适宜条件下饲养并检测其1至7每日产卵量和1至7每日卵孵化率。
技术路线:对截形叶螨的v-atpase基因进行扩增测序合成截形叶螨v-atpase基因的dsrna观察截形叶螨的产卵量和卵孵化率浸泡法沉默v-atpase基因的表达实验方案:1、截形叶螨实验种群的构建。
在菜豆上接入一头静Ⅲ时期的雌螨,让其孤雌生殖。
4. 研究创新点
本课题的两个独特之处:1、 本课题对截形叶螨中的v-atpase进行研究。
此前有加拿大的科研人员对二斑叶螨进行了基因组测序,并验证了部分基因的功能。
此外,他们还进行了二斑叶螨v-atpase基因的敲除实验,结果表明v-atpase基因表达受干扰的二斑叶螨产卵量减少,受干扰的二斑叶螨体色变黑并且寿命缩短。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展2017.3.29至2017.7.9学习饲养截形叶螨并构建实验种群及对v-atpase基因进行扩增测序2017.12.27至2018.1.14合成截形叶螨v-atpase的dsrna2018.2.26至2018.3.15浸泡法对v-atpase基因进行沉默,观察产卵量和卵孵化率课题进展:1、课题已完成的内容:①实验所需的截形叶螨种群构建完成。
通过回交培养野外种群获得了一个单雌系,将其作为本课题实验种群进行研究。
②完成了截形叶螨v-atpase基因的扩增。
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