油菜下卷叶突变体Bndcl1的形态学与生理生化分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

叶是植物重要的营养器官，通过光合和呼吸作用提供植物生长发育所需要的能量, 同时储存有机物和矿质营养。

叶形态是植株形态建成的重要组成部分，对于大多数栽培作物而言，叶的形态和空间分布影响光能利用效率，在很大程度上决定着作物的产量和品质[1]。

叶片的正常发育是一个复杂的过程，包括叶原基从顶端分生组织周边区部位的起始和决定、叶极性的建立、细胞的分裂和伸长以及叶脉模式的形成等，在这些发育过程中的任何异常都会或多或少地导致叶形态的改变。

2. 研究的基本内容和问题

叶片性状的突变通常会导致植物一系列的生理改变，因此通过观察记载甘蓝型油菜叶片性状突变体的形态学鉴定（表型观察统计），细胞学鉴定（观察叶肉细胞，叶绿体形态数目），生理生化鉴定（叶绿体荧光，光合速率测定，酶活测定等），以了解不同叶片性状突变体的性状表型特征以及细胞和亚细胞水平的结构变化，分析候选基因的筛选以及功能，探讨突变机制，控制相应性状基因并将其应用到理想株型的改良。

随着现代分子生物学技术的崛起和进步，克隆和研究控制卷叶性状的基因，为育种提供理论基础，为叶片性状突变体的进一步研究积累资料。

3. 研究的方法与方案

1.形态学鉴定（表型观察统计）：下卷叶突变体bndcl1田间性状调查：观察记载突变体田间性状及主要农艺性状，分别统计在培养基中生长20天的野生型和突变体植株第三片真叶的叶相关系数：包括叶柄长，叶形指数(叶长/叶宽)，叶面积，叶周长，侧卷指数tc(transversalcurvature)，纵卷指数 lc(longitudinalcurvature)和叶夹角，叶片卷曲率 。

2.细胞学鉴定（观察叶肉细胞，叶绿体形态数目）：为了观察叶色突变体叶肉细胞的变化，通过石蜡切片分析：具体步骤是:(1)材料固定（2冲洗和脱水（3透明（4）浸蜡包埋（5）包埋(6) 切片及展片(7)溶蜡和复水（8）染色，脱水、(9) 封片及镜检。

叶绿素含量的测定：在5叶期及抽薹期对叶色突变体和野生型植株，取第4片叶进行叶绿素含量测定，每个材料3次重复，将所取叶片去除叶脉并剪成小碎片，称取0.2g放入50ml离心管中，倒入25ml的丙酮：乙醇(1:1,v/v)溶液。

4. 研究创新点

本研究通过对甘蓝型油菜Bndcl1突变体进行形态学、细胞学和生理生化等方面的鉴定，了解突变体的性状表型特征以及细胞和亚细胞水平的结构变化，分析候选基因的筛选以及功能，探讨突变机制，控制相应性状基因并将其应用到理想株型的改良，为后续突变基因定位、候选基因筛选及其功能研究奠定基础。

5. 研究计划与进展

记载甘蓝型油菜叶片性状突变体的形态学鉴定的各种数据,统计样本数大于20株，最后用imge j软件整理数据。

细胞学鉴定通过石蜡切片分析看镜片测出叶肉细胞，按公式算出叶绿素舍量(mg/g）=c*v/1000a，叶绿体的超微结构透射电镜观察，选取典型视野拍照。

生理生化鉴定中光合速率：根据几率的图谱，计算出固定荧光（f0）和总荧光(fmax)的数值，并按下述公式计算可变荧光和可荧光速率。