鱼尼丁受体突变型果蝇对双酰胺类杀虫剂敏感性的变化开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）二化螟chilo suppressalis（walker）属鳞翅目，螟蛾科，是我国水稻上危害最为严重的常发性害虫之一，蛀食水稻茎部，为害分蘖期水稻，造成枯鞘和枯心苗；为害孕穗、抽穗期水稻，造成枯孕穗和白穗；为害灌浆、乳熟期水稻，造成半枯穗和虫伤株。

为害株田间呈聚集分布，中心明显。

国内各稻区均有分布，较三化螟和大螟分布广，但主要以长江流域及以南稻区发生较重，近年来发生数量呈明显上升的态势。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标 为了探究靶标突变对抗药性产生的贡献，通过CRISPR/Cas9技术对模式昆虫果蝇的鱼尼丁受体基因(RyR)进行编辑，分别测定突变体果蝇和野生型果蝇对四种双酰胺类药物的敏感性，分析抗性的变化，确定鱼尼丁受体突变对双酰胺类药剂抗性的贡献。

研究内容1、用毒饲料法测定四种双酰胺类药剂对野生型和突变体果蝇的敏感性；拟解决的问题 鱼尼丁受体突变型果蝇的成功构建

3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析研究方法 利用crispr/cas9基因编辑技术将野生型果蝇鱼尼丁受体基因4753m突变为4753i和4946g突变为4946e，通过平衡子整合以及pcr产物测序，鉴定获得纯合的m4753i和g4946e同时突变的突变体果蝇。

测定果蝇幼虫对双酰胺类的生物活性：选用四种双酰胺类杀虫剂氟虫双酰胺、氯虫苯甲酰胺、四氯虫酰胺、溴氰虫酰胺，采用饲料混药法分别测定其对野生型和ryr突变型果蝇的室内毒力，求出其lc50及其95%置信限。

（1）配制果蝇产卵饲料倒入平板中，分别将野生型与ryr突变型果蝇雌雄以相等比例导入平板中，使其自由交配产卵。

4. 研究创新点

特色或创新之处目前对二化螟对双酰胺类抗性机制研究还不够充分，本实验采用CRISPR/Cas9技术对模式昆虫果蝇鱼尼丁受体基因进行编辑来研究二化螟鱼尼丁受体突变对双酰胺类抗性产生的作用，对研究二化螟的抗性机制，研制新型杀虫剂防治二化螟有重要意义。

5. 研究计划与进展

1.建立野生型和RyR突变型果蝇对氯虫苯甲酰胺、氟虫双酰胺、溴氰虫酰胺、四氯虫酰胺四种双酰胺类杀虫剂的敏感基线。

2.分析RyR突变型果蝇和野生型果蝇的敏感基线及LC50值，探究靶标突变对双酰胺类杀虫剂抗性机制。